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Se determinó la concentración letal 50 (CL 50) para el
diazinón (Dz) en poblaciones susceptibles de Haematobia irritans,
utilizando papeles de filtro de 0,20 mm de grosor y 100 g/m2
de peso, impregnados con concentraciones crecientes de Dz: 0,05; 0,1;
0,2; 0,4; 0,8 µg / cm 2. En cinco poblaciones de H.
irritans se estimó las CL50 y los intervalos de confianza
de 95 % derivados de la mortalidad de poblaciones susceptibles de H.
irritans en relación a la dosis, por medio del análisis “probit”. El
valor de la CL50 y los límites de confianza 95 % fueron de
0,095 y 0,080-0,112 µg/ cm2, respectivamente. La información
obtenida podrá ser utilizada como valor de referencia para poblaciones que
demuestren una disminución de la eficacia del diazinón para el control de
la H. irritans.
Palabras clave:
Haematobia irritans, diazinón,
concentración letal 50, técnica de papel de filtro
Introducción
En estudios donde se evaluaron la resistencia de Haematobia irritans
a cipermetrina y diazinón se demostró que las poblaciones naturales
resistentes a la cipermetrina eran aún susceptibles a los organo-
fosforados (OP) como el diazinón (Guglielmone et al., 2001a).
Debido a que la frecuencia en los tratamientos con insecticidas es mayor
en los rodeos lecheros que en el ganado para carne (Torres & Sheppard
1996), se produciría una mayor resistencia relativa a los insecticidas en
las áreas productoras de leche que en las productoras de carne
(Guglielmone et al., 2001b). Actualmente existe una resistencia
generalizada de las poblaciones de H. irritans a la cipermetrina,
en consecuencia, se está incrementando el uso de insecticidas OP para su
control.
Para evaluar la resistencia de una población a un determinado insecticida
es necesario utilizar pruebas de campo y test de resistencia “in vitro” en
el laboratorio. Éstas consisten, básicamente, en exponer poblaciones de
moscas aún susceptibles a concentraciones crecientes del principio activo
en estudio, determinar la CL50 y ese valor tomarlo como CL50
de la “población de referencia”. Esa misma técnica se aplica a
poblaciones para evaluar su grado de susceptibilidad , pudiéndose
comparar la CL50 obtenida con la CL50 de la
población de referencia. De esta manera se puede cotejar la CL50
de otras poblaciones naturales a través del tiempo (Aguirre et al.,
1995) y realizar un seguimiento para estimar la evolución de la
resistencia (Guglielmone et al., 2000).
En estudios previos se evaluó la técnica de tratamiento de frascos de
vidrio y de papeles de filtro (Burg et al., 1995) (Castelli et
al., 2000) como soportes para determinar la concentración letal 50 %
(CL50) y 90 % (CL90) de diazinón (Dz) en
poblaciones de H. irritans susceptibles a los insecticidas OP. Los
resultados obtenidos al utilizar papeles de filtro N° 595 (S&S) indicaron
falta de correspondencia entre el gradiente de la concentración y la
mortalidad. En cambio al utilizar frascos de vidrio impregnados con
insecticida hubo relación entre incremento de concentración y mortalidad;
pero la preparación del soporte era muy laboriosa y además bajo
condiciones de campo, se observó que hasta en el 30 % de los casos se
obtenían resultados erráticos (Fader et al., 2003), siendo mayor
el error al acrecentarse el intervalo entre la preparación y su uso.
Debido a los inconvenientes en la preparación y conservación de los
soportes de vidrio se evaluaron otras alternativas tendientes a
simplificar la preparación e incrementar el tiempo de vida útil del kit
para test de resistencia .
Como el
papel de filtro como soporte tiene la ventaja de la practicidad en la
preparación y la mayor vida útil de los mismos, se probaron papeles de
filtro similares al N° 595 (S&S); pero en base a lo expuesto por Barros
et al., (2002) se utilizaron papeles de mayor peso y grosor. El
objetivo del presente trabajo es buscar el soporte más adecuado para
realizar los test de resistencia de Dz y con este nuevo procedimiento
obtener la CL50 para una población aún susceptible a este
insecticida que puede ser considerada de referencia.
Materiales y Métodos
La
metodología de preparación y mantenimiento de los papeles de filtro tanto
como de la captura y exposición de las moscas a los papeles impregnados
fue idéntica a la empleada por Castelli et al., (2000). Se
utilizaron como soportes papeles de filtro de 90 mm de diámetro Whatman N°
40 Nº 5892 (Schleicher & Schuell ) que fueron impregnados con
Dz (92,9 % de pureza, Novartis), en INTA EEA Rafaela, empleando las
siguientes concentraciones 0,05; 0,1; 0,2; 0,4 y 0,8 µg/ cm2.
Se utilizó como diluyente acetona pura (Merck, p.a.). Como control se
usaron papeles de filtro tratados sólo con acetona. Además se utilizaron
papeles de filtro Whatman # 1, provenientes de Empresa Brasilera de
Pesquisa Agropecuaria , Pantanal (EMBRAPA, Pantanal ) preparados con Dz
(97,3 % pureza , Novartis) diluido en acetona (Merck p.a.) para obtener
las siguientes concentraciones: 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,2; 1,6 µg/ cm2
y los controles tenían acetona solamente. Se realizaron tres repeticiones
para obtener la CL50 , extrayendo las moscas del mismo lote de
bovinos de INTA EEA Rafaela, que nunca habían sido tratados con OP. Se
utilizó el programa Polo PC (Copyright 1987 Le Ora Software) para estimar
las CL50 y los límites de confianza del 95 % (LC95)
derivados de la mortalidad de las poblaciones de H. irritans en
relación a la dosis, por medio del análisis “probit” (Russell et al.,
1977). Se consideró estadísticamente diferente a las poblaciones que no
superponían los valores de LC 95.
Una vez
seleccionado el papel más conveniente se realizaron 5 pruebas para
determinar la CL50 para el Dz en poblaciones susceptibles de
H. irritans, extraídas de bovinos de INTA EEA Rafaela no
tratados con insecticidas OP.
Resultados y discusión:
En base a
resultados propios y los de Barros et al., (2002) se comenzó a
trabajar con papeles de mayor peso y grosor. Los papeles de filtro
utilizados se caracterizan por tener un 11 % de mayor grosor y 15 % de
mayor peso, que los papeles de filtro utilizados en un trabajo anterior
(Castelli et al., 2000).
Se utilizaron dos tipos de
papeles de filtro con las características mencionadas, disponibles en el
mercado argentino (Whatman N° 40 y Nº 5892 Schleicher &
Schuell) y similares al presentado por Barros et al., (2002 )
preparado en Embrapa, Pantanal. Los resultados se presentan en el Cuadro
1.
Cuadro 1. Comparación
de la concentración letal 50 ( CL 50)
en µg / cm2 y los límites de confianza de 95% (LC 95),
utilizando 3 tipos diferentes de papeles en la realización del test de
resistencia con la misma población susceptible a los organo fosforados de
Haematobia irritans, extraídas de bovinos de INTA EEA Rafaela.
|
Papel |
CL
50
(µg /cm2 )
Promedio ± Desvío estandar |
LC
95 |
|
Whatman N°40
EEA INTA Rafaela |
0,2304 ± 0.0544
|
0,2168 - 0,2367
a
* |
|
S&S 5892
EEA INTA Rafaela |
0,1150 ± 0.0336
|
0.1043 - 0.1261
b
* |
|
Whatman # 1 Embrapa
(Brasil) |
0,1249 ± 0,0264
|
0,1130 - 0,1251
b
* |
Letras no compartidas indican diferencias significativas
estadísticamente (p > 0.05)
De acuerdo a los resultados
obtenidos de la CL50 se optó por el S&S que no presentó
diferencias significativas ( p > 0.05) al elaborado en Embrapa, lo cual
posibilita uniformar el sistema de evaluación para avanzar en forma
conjunta en el intercambio de información obtenida en la región.
Definido el soporte, se
realizaron 5 pruebas para determinar la CL50 de la población de
moscas susceptibles de H. irritans, extraídas de bovinos de INTA
EEA Rafaela que no han sido tratados con OP. Los resultados obtenidos se
presentan en el cuadro 2.
Cuadro 2
Concentración letal 50 (CL50)
en µg/cm2 de papel de filtro y límite de confianza 95% (LC
95) para el diazinón, obtenida en las cinco repeticiones
realizadas con poblaciones de Haematobia irritans
susceptibles a los OP, extraídas de bovinos de INTA EEA Rafaela.
|
PRUEBAS |
DIAZINÓN |
|
|
CL50
(µg /cm2 )
|
LC
95 |
|
1 |
0,088 |
0.077-0.099
a
* |
|
2 |
0,104 |
0.089-0.121
a * |
|
3 |
0,082 |
0.068-0.097
a
* |
|
4 |
0,087 |
0.071-0.101
a
* |
|
5 |
0,117 |
0.096-0.141
a
* |
|
Promedio |
0,095 |
0.080-0.112
a
* |
* Intervalos de confianza
seguidos por la misma letra indica falta de significancia estadística.
La
utilización de los papeles de filtro impregnados con insecticidas OP está
en línea con la propuesta por otros autores (Farnsworth et al.,
1997; Barros et al., 1999) y es idéntica a la utilizada para
evaluar la resistencia de H. irritans a los piretroides en la
Argentina (Guglielmone et al.,2001a ). La metodología propuesta
contribuye a simplificar los test de resistencia “in vitro” para el Dz y
puede extrapolarse a otros insecticidas OP. Además esta información podrá
ser utilizada como valor de referencia para poblaciones que demuestren
una disminución de la eficacia del Dz para el control de la H. irritans
Agradecimientos
Se
agradece a los Sres. Oscar Warnke,
Adolfo Boidi y Miguel Marín por su colaboración en las tareas de campo y
de laboratorio. A los Dres. Tadeu A. Barros (EMBRAPA Pantanal, Brasil) y
Joao R. Martins (Centro de Pesquisa Veterinária “Desiderio Finamor”,
Brasil) por su contribución en la puesta a punto de la técnica. También se
agradece la colaboración de Alejandro Olivieri (Facultad de Ciencias
Bioquímicas de la Universidad Nacional de Rosario) por la información de
las características técnicas de los materiales.
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