|
|
Inicio >
Información >
Posters
Rápida identificación por PCR de Salmonella enteritidis,
detección de Salmonella SPP. y de algunos serovares patógenos de
importancia veterinaria y bromatológica.
|
|
|
|
A. Velilla¹; S. E.Feingold², Y. D. Huberman³ y H. R.
Terzolo³.
¹Facultad de Ciencias Exactas y Naturales,
Universidad Nacional de Mar del Plata; ²Lab. de Biotecnología
Agrícola-Área PROPAPA; y ³Lab. de Bacteriología-Área de Producción
Animal, E.E.A. INTA Balcarce-Unidad Integrada Balcarce INTA-Fac. Cs.
Agrarias, UNMdP, Ruta 226 Km. 73,5, CC276,7620-Balcarce, Argentina.
¹e-mail:avelilla@balcarce.inta.gov.ar |
|
Click para ampliar. |
|
INTRODUCCION
*Salmonella es un importante agente
etiológico de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs) al
contaminar la carne, huevos y productos derivados. Su detección en
alimentos antes de que estos sean consumidos prevendría muchos brotes
y permitiría implementar controles previos a la ocurrencia de
enfermedad. Los métodos de diagnóstico bacteriológico son laboriosos,
requieren tiempo y no todas las cepas aisladas pueden ser
identificadas, contrariamente, la técnica de PCR es una metodología
rápida, específica y muy sensible para detectar, identificar y
caracterizar a las bacterias de dicho Género.
OBJETIVOS
- Detectar la presencia del Género
Salmonella e identificar mediante subtipificación molecular
a la serovariedad Enteritidis.
- Identificar a S. Enteritidis,
S. Dublín, S. Gallinarum, S.
Typhimurium y S. Cholerasuis portadoras de plásmidos de virulencia.
- Implementar la técnica de PCR como sistema
de detección e identificación de Salmonella en
muestras de Gallus gallus.
|
|
|
|
|
METODOLOGIA
- Se extrajo DNA [1] de cepas liofilizadas
de 25 diferentes serovariedades de Salmonella y de
otros 20 Géneros bacterianos.
- Se inocularon gallinas por vía oral con
dosis de entre 1 y 5 x108 CFU de una cepa vacunal de S.
Enteritidis (RifampicinaR + Ac. NalidixicoS) y
se desafiaron a distintos tiempos post-vacunación con 5x108 CFU de
una cepa S. Enteritidis patógena (RifampicinaS + Ac.
NalidixicoR).
- Las aves se sacrificaron a los 5, 10 y 15
días después del desafío, macerados de bazo, hígado, ovario y ciego
se incubaron a 37°C en caldo Luria durante 24 hrs. Después de la
incubación se centrifugaron y del precipitado celular se extrajo DNA
[1].
- Para control bacteriológico se usaron
placas de Agar Verde brillante + 100µg de rifampicina + 100µg de
estreptomicina para aislar la cepa vacunal y Agar Verde brillante +
100µg de ácido nalidíxico para aislar la cepa de desafío.
- Las condiciones de la reacción de PCR y de
los primers empleados [2,3,4] fueron modificadas para:
a) Detectar Salmonella spp. (Foto
Nº I).
b) Detectar cepas portadoras del plásmido de
virulencia Spv (Foto Nº II y N° III).
c) Identificar a la serovariedad Enteritidis (Foto
Nº IV).
d) Detectar y diferenciar las cepas de S.
Enteritidis vacunal y de desafío (Foto N° V y N° VI).
- Los productos amplificados fueron
detectados en geles de agarosa común (1,5% ) con bromuro de etidio
(10 mg/ml).
|
|
Foto I-II-III-IV-V y VI.
Click para ampliar. |
|
RESULTADOS. (Fotos).
CONCLUSIONES
- Detectar al Género Salmonella.
- Detectar al plásmido Spv, específico de
las serovariedades patógenas Enteritidis, Typhimurium, Dublín,
Gallinarum y Cholerasuis.
- Identificar a la serovariedad Enteritidis.
- Detectar y diferenciar la cepa de S.
Enteritidis desafío de la cepa vacunal.
- Demostrar la inocuidad de la cepa vacunal
cuyo DNA desaparece totalmente de los órganos de las aves vacunadas
2 días después de la inoculación oral.
|
|
| |
|
Perspectivas
- Se está estandarizando un método de diagnóstico rápido para el
envío de muestras a distancia mediante la utilización de papeles
absorbentes como soporte de muestras de macerados de órganos o
suspensiones de hisopados cloacales.
|
|
| |
|
Referencias Bibliográficas
[1] Lagatolla et al. (1996). Journal of Clinical
Microbiology. 34: 2440-2443.
[2 ] Way et al. (1993). Appl. Environ. Microbiol.
59:1473-1479.
[3 ] Agron et al. (2001). Appl. Environ. Microbiol.
67:4984-4991.
[4] Chiu, C., & J. T. Ou. (1996). Journal of Clinical Microbiology.
34:2619-2622.
[5] Linde et al. (1997). Lohmann Information N°20:23-31. |
|
| |
|
|
|
| |
|
| |
 |
I Congreso Argentino de
Microbiología de Alimentos.
La microbiología de Alimentos
y la Producción.
Una mirada actual.
X Jornadas Argentinas de
Microbiología.
14 - 16 de mayo de 2003- Santa
Fe, Argentina |
 |
|
|
|
| |
|
|
|
|
