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Evaluación de un método de aislamiento de Salmonella Enteritidis para formas "L" empleando órganos de gallinas experimentalmente infectadas

 
   

Huberman Y. D. y Terzolo H. R.

Laboratorio de bacteriología, Grupo Sanidad Animal, Departamento de Producción Animal, INTA EEA Balcarce, Ruta 226 Km. 73,3, Balcarce (7620), Provincia de Bs. As., Argentina. yhuberman@balcarce.inta.gov.ar 

 

 




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Introducción

El incremento mundial de la infección de aves con Salmonella Enteritidis (SE) requiere la introducción de métodos más eficientes para su detección. Es común aislar SE de la progenie de pollitos BB hijos de reproductores adultos negativos a la bacteriología clásica. Esta bacteria permanece viable dentro de las células del huésped en dos tipos de formas L: protoplasto – pérdida total de la pared celular - o esferoplasto – pérdida parcial de la pared celular. Los métodos clásicos de bacteriología para el aislamiento de SE no son adecuados para aislarla en sus formas L y es necesario mejorar la eficiencia de los métodos tradicionales.

Objetivo

Evaluar un método de aislamiento de SE en fase L empleando aves experimentalmente inoculadas.

Materiales y Métodos

Se inocularon 129 gallinas ponedoras SPF de 28 semanas de edad, con una cepa patógena de SE del fagotipo 4. Cada gallina fue oralmente inoculada con 5 ml conteniendo 5 x 109 UFC. Las gallinas fueron observadas durante 15 días. De cada gallina se extrajeron el hígado, el bazo y los ovarios, los cuales se sembraron usando cada uno de los siguientes tres métodos incubados a 37°C durante 20 horas.

1) Método Tradicional (MT): Se sembraron los órganos en Caldo Tetrationato con verde brillante y novobiocina (CT) y después de incubar se cultivaron en agar XLD con tergitol (XLDT).

 

2) Método Tradicional Ampliado (MTA): Se agregaron dos subcultivos diarios sucesivos en CT antes de cultivar en agar XLDT.

 

3) Método para Formas L (MFL): El 1º subcultivo se efectúo en Caldo L (CL), para proveer protección osmótica, el 2º en Caldo Lactosado, el 3º en CT y finalmente se cultivó en Agar XLDT.

 

 

 

 

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Resultados

En el MT se detectaron 207 muestras positivas mientras que en el MTA se encontraron 24 muestras adicionales (anteriormente negativas), diferencia que no es estadísticamente significativa. En cambio utilizando el MFL se logró aislar SE a partir de 48 órganos adicionales a los 207, siendo esta diferencia altamente significativa (p < 0.001). Sin embargo, 6 muestras fueron positivas en el MTA pero negativas en MFL.

Órgano

n

Positivos

Negativos

verdaderos a  

MT

TA

MFL

Hígado

129

74

80

89

37

Bazo

129

109

112

118

9

Ovario

129

24

39

48

68

Total

387

207

231

255b

114

a Negativos verdaderos – muestras negativos en los tres métodos.

b Estadísticamente significativo (Fisher p=0.0006)

 

Conclusiones

Dada la frecuente existencia de aves que resultan ser falsas negativas al diagnóstico bacteriológico clásico (MT) se sugiere el empleo rutinario del MFL solo o combinado con el MTA. La SE está presente en forma intracelular viable no cultivable dentro de las células del ave y al perder la pared celular se requieren usar inicialmente medios de cultivo que brinden protección osmótica.

 

 

 

Poster presentado en XVII CONGRESO LATINOAMERICANO DE MICROBIOLOGÍA - X CONGRESO ARGENTINO DE MICROBIOLOGÍA ORGANIZADO POR LA ASOCIACIÓN ARGENTINA DE MICROBIOLOGÍA - 17 al 21 de octubre de 2004, C.C. Gral. San Martín, Buenos Aires - Argentina

 

 

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