Memoria Anual 2002
Objetivos del Grupo
- Desarrollar y adaptar tecnología para el
diagnóstico, control y prevención de los problemas de salud animal de
importancia en la región.
Usuarios
- Productores y sus asociaciones; industria
farmacéutica veterinaria; veterinarios (rurales y de Laboratorios de
Diagnóstico) y sus asociaciones (Círculos y Colegios); Facultades de
Veterinaria, Direcciones de Ganadería de las provincias, SENASA (programas
de control y erradicación de enfermedades: aftosa, brucelosis,
encefalopatías animales transmisibles, tuberculosis, paratuberculosis,
leucosis y enfermedades de las aves), otras unidades del INTA.
Actividades de comunicación
Extensión, transferencia de tecnología y comunicación
científica se canalizan a través de disertaciones destinadas a productores y
profesionales; publicación de artículos científicos y de divulgación y
comunicaciones cortas o conferencias en Congresos y Reuniones Técnicas.
Se mantiene una página en Internet (http://www.inta.gov.ar/balcarce/gsa)
para presentar las actividades de investigación, servicios y capacitación
ofrecida por el Grupo; además de información epidemiológica de enfermedades
en la región y artículos técnicos de actualidad.
Actividades de capacitación
El Grupo ofreció en el año 2002 14 cursos cortos de uno a
dos días de duración para profesionales, estudiantes avanzados y
productores.
Desde el año 1989 funciona la Residencia Interna en
Sanidad Animal para Veterinarios recién graduados, realizan un entrenamiento de
18 meses en el Grupo. Hasta diciembre del 2002 completaron la Residencia 76
veterinarios; en diciembre del 2002 se realizó una Jornada de Actualización
con la asistencia de 38 ex residentes.
La Universidad Nacional de Mar del Plata aprobó en
diciembre del 2002 la Maestría en Sanidad Animal, los cursos específicos son
dictados en su mayoría por investigadores del Grupo en el marco del convenio
INTA-UN de Mar del Plata.
Desde el año 2001 se ejecuta un programa de interacción
profesional para profesionales veterinarios rurales en la Cuenca del Salado con
el objetivo de generar un banco de datos de enfermedades, difundir esta
información mediante informes y boletines técnicos y mantener una
capacitación profesional continua.
DIAGNOSTICO VETERINARIO ESPECIALIZADO
El objetivo del proyecto es mantener en funcionamiento un
sistema de asistencia técnica veterinaria integral, con capacidad de
resolución de problemas de complejidad en salud animal.
La metodología consiste en la identificación,
caracterización y propuestas de medidas de control de problemáticas
sanitario-productivas que causan enfermedad, mortandad y baja productividad
(e.g. fertilidad, ganancia de peso, muertes perinatales). Para ello se cuenta
con un equipo de campo y especialistas en las disciplinas de microbiología,
bioquímica, virología, patología, toxicología y epidemiología.
El diagnóstico final y las medidas de control son
remitidos al profesional que efectuó la consulta mediante el envío de un
informe final detallado. Por otra parte se obtiene información regional que es
transferida al medio, se genera un banco de datos epidemiológico y se integra
un sistema de vigilancia epidemiológico pasivo de enfermedades exóticas
regionales y nacionales.
Identificación y caracterización de problemas sanitarios.
En el año 2002 se recibieron 720 casos lo que representa
una reducción del 20%. Las muestras fueron remitidas desde 10 provincias
diferentes y 82 partidos de Buenos Aires.
Asistencia a establecimientos con problemas sanitarios
La asistencia in situ a establecimientos con problemas
sanitario-productivos se efectuó en 78 oportunidades, recorriéndose una
distancia de 44615 km. Las muestras derivadas a los laboratorios sumaron 975, el
laboratorio de Bacteriología procesó el 30.5%, Patología el 24.0%,
Bioquímica el 13.5%, Toxicología el 8%, Virología el 7.5%, Parasitología 4%
y enfermedades venéreas-neosporosis el 12,5 %.
Diagnósticos significativos
Nuevamente la Leptospirosis produjo graves pérdidas en los
rodeos, con episodios de abortos y mortandad en terneros desde pocos días de
vida hasta los 6-7 meses de edad. Las condiciones climáticas imperantes sumado
a la baja inmunidad de los vientres, como consecuencia de la no-vacunación
favorecieron la aparición de la enfermedad. La intoxicación por consumo de
algas verde azuladas produjo la muerte de un elevado número de vacas y pérdida
de estado corporal presentando lesiones de fotosensibilización. Se presentaron
numerosos casos de Actinobacilosis, con una incidencia inusual, afectando
cadenas ganglionares.
Investigación diagnóstica
Seguimientos tacto-parto: se concluyó con el
seguimiento tacto-parto iniciado en un establecimiento ubicado en el partido de
Tres Arroyos. Las pérdidas finales fueron de un 5.1%. El 50 % de estas pérdidas
pueden ser atribuidas a DVB.
Toxicidad de Asclepia melladora (quiebra arado,
lecherona) en bovinos: Se realizó la ingestión forzada de Asclepia
melladora a dos bovinos a razón de 8 gramos de materia seca por kg de peso
vivo. Los animales murieron dentro de las 24hs de haber ingerido la planta. Las
lesiones principales fueron a escala gastrointestinal.
Toxicidad de Prosopis caldenia (caldén).
Transcurridos 210 días de suministro se dio por concluido el ensayo de
toxicidad de Prosopis caldenia. El animal no presentó signos compatibles con la
toxicidad que producen distintos componentes de la familia Prosopis,
probablemente el material empleado no haya sido el adecuado.
Raigras con y sin hongo endófito, efecto del consumo
sobre parámetros productivos en bovinos. Durante los tres períodos en que
se realizó el seguimiento los animales que consumieron Raigras con alto grado
de infestación con Acremonium lolli, no presentaron signos nerviosos. La
ganancia de peso no mostró diferencias significativas entre los dos grupos. El
contenido de humedad de la materia fecal fue similar entre los grupos.
Actinobacilosis: Se evaluó la eficacia de un
antibiótico (Tilcomisina) como curativo en dicha enfermedad. El antibiótico
mostró escaso efecto terapéutico.
Hipomagnesemia: ensayos de suplementación mediante
el uso de rollos con incorporación de Mg.
Ensayo 1: El Mg fue incorporado al rollo en el momento de su
confección. Se empleó óxido de Mg como fuente del mismo. Los valores de Mg
sérico de los animales consumiendo el rollo con Mg incorporado presentaron
diferencias estadísticamente significativas con respecto al grupo no tratado.
Ensayo 2: El Mg se incorporó al rollo en el momento de su empleo
mediante el uso de una bomba inyectora. Se empleó sulfato de Mg. Los
resultados están siendo analizados.
ENFERMEDADES DE LA REPRODUCCIÓN DE LOS BOVINOS
1. TRICOMONIASIS
Se realizaron actividades de apoyo en el diagnóstico,
provisión de cepas y entrenamiento de personal técnico de los Laboratorios de
diagnóstico veterinario a lo largo del año. Dentro de los mencionados apoyos
se destaca la presencia de cepas de protozoos de morfología microscópica
similar a T. foetus aislados de toros provenientes de rodeos de cría de la
provincia de Buenos Aires para su caracterización ultramicroscópica y
molecular.
Dichos diagnósticos crean conflictos (falsos positivos)
los cuales no pueden resolverse por la microscopia común. Se realizaron
estudios de ultramorfología con el apoyo del Dr. Bolondi (INTA Castelar) y de
la Dra. Benchimol (Universidad de Santa Ursula, Botafogo, Rio de Janeiro,
Brasil). Se logró determinar la ultraestructura mediante microscopía
electrónica de transmisión y de barrido. Los protozoos identificados
presentaron 4 flagelos anteriores y uno posterior.
Basado en las características mencionadas se consideró
que los organismos correspondían a Tetratrichomonad sp. Los cultivos positivos
fueron secuenciados mediante PCR (polymersase chain reation), utilizando dos
pares de primers: un par de ellos (TF1 y TF2) amplifica material genómico de
protozoos del género Trichomonad y el otro par de primers (TF3 y TF4) amplifica
una secuencia específica para T.foetus. Las cepas estudiadas presentaron
material genómico amplificado con los primers TF1 y TF2, pero no con los
primers TF3 y TF4. Se consideró por lo tanto que los organismos correspondían
a Tetratrichomonad sp.
La identificación de este organismo en toros jóvenes
confirma anteriores informes que mencionan la presencia de protozoos no
específicos, de probable origen intestinal, como causa de diagnóstico falso
positivo de tricomoniasis bovina. La presencia de dichos organismos entéricos
en la cavidad prepucial se debería a un comportamiento homosexual común en
toros jóvenes criados en grupos o bien por contaminación fecal del pene y
prepucio.
2. NEOSPOROSIS BOVINA
Se elaboró una vacuna experimental a base de taquizoítos
de Neospora caninum inactivados en formol y se vacunaron vaquillonas por vía
subcutánea. La respuesta inmune humoral fue evaluada mediante la prueba de
inmunofluorescencia indirecta (IFI). Los títulos de anticuerpos humorales
generados por la vacunación resultaron bajos siendo necesario reformular el
inmunógeno.
Para ello se aumentó la concentración de taquizoitos
agregando un adyuvante y estimulador del sistema inmune mediado por células. Se
utilizan vaquillonas Holando Argentino del tambo del INTA, Balcarce.
Se evaluó la presencia de anticuerpos anti-N. caninum en
ciervos colorados pertenecientes a un establecimiento de producción comercial
de la provincia de Bs. As. mediante la prueba de micro-aglutinación. En la
categoría de ciervas de 15 meses de edad se obtuvieron 4/46 (8.7%) animales
positivos a la dilución 1:20 mientras que para las hembras de 5-6 años
resultaron 3/46 (6.5%) positivos dos al título de 1:20 y una a 1:40,
respectivamente. Finalmente 3 de 6 hembras adultas importadas de Nueva Zelanda
resultaron positivas a la dilución 1:20.
También se realizó la detección serológica de
anticuerpos anti-N. caninum en toros pertenecientes a la provincia de Corrientes
mediante la prueba de IFI. Se sangraron 305 toros (Bos taurus y Bos indicus)
de19 rodeos. La seroprevalencia de N. caninum fue del 4.9% (15 de 305). No
existieron diferencias entre las poblaciones de los diferentes departamentos. De
los 19 rodeos, 47.4% tuvieron al menos un animal seropositivo. No existió
asociación entre la serología y el biotipo o edad (P >0.05).
Se analizaron además 1820 sueros correspondientes a fetos
y hembras bovinas con problemas de abortos y pérdidas reproductivas como parte
de las actividades comprendidas en el SDVE.
3. BRUCELOSIS
Efecto de la vacunación con B. abortus RB51 en toros adultos
Se seleccionaron 14 toros adultos A. Angus, Hereford o sus
cruzas, seronegativos a las pruebas de rutina para brucelosis. Los toros fueron
divididos en dos grupos, vacunado (n=6): vacunados con B. abortus RB51 por vía
subcutánea en el área axilar con 2 ml de la vacuna comercial (1x1010). Control
no vacunado (n=8). Serología: 15 días postvacunación (pv) y posteriormente
cada 15 días hasta los 75 días pv los animales fueron sangrados. Los sueros
fueron analizados con las pruebas de BPA, seroaglutinación en tubo (SAT) y
2-Mercaptoetanol (2-ME).
Muestras de fluidos seminales: a los 15, 30, 45, 60
y 75 pv se recolectó fluido seminal de todos los animales.
Examen clínico: Los días 15, 30, 45, 60 y 75 pv se
realizó la evaluación clínica genital completa.
Desafío: a los 90 días pv se desafiaron por vía
conjuntival todos los animales vacunados y 6 de los toros controles con B.
abortus 2308. Dos toros controles quedaron sin desafiar.
Serología, bacteriología y evaluación genital:
cada 15 días todos los animales fueron muestreados hasta el momento de la faena
en el día 180.
A los 30 días postvacunación con B. abortus RB51, el toro
N°2 presentó reacción positiva a la prueba BPA, título de 1/25 a las pruebas
SAT y 2ME y sospechoso a la FC. A los 60 días postvacunación fue negativo a
BPA y a los 90 días fue positivo a BPA pero negativo al resto de las pruebas
realizadas. El resto de los animales vacunados y los controles sin vacunar
resultaron serológicamente negativos a brucelosis hasta el momento del
desafío.
Aislamientos postvacunación: se aisló B abortus
RB51 (confirmada por el resultado de la aplicación de PCR del toro vacunado
N°4 a los 30 días postvacunación. No hubo aislamientos del resto de los
animales.
Frotis de semen: No se observaron células
inflamatorias.
Clínica posvacunación: no se detectaron
anormalidades genitales.
Clínica pos desafío: se detectó hasta el momento
inflamación de la cola de epidídimo y de la vesícula seminal en algunos toros
desafiados y vacunados.
Este ensayo se encuentra aún en realización.
PCR aplicado a muestras de aguas contaminadas con Brucella abortus.
Se utilizaron muestras de agua provenientes de un arroyo al
cual vierten sus efluentes un frigorífico, agua de arroyo de un campo libre de
brucelosis y agua corriente. Las muestras fueron diluidas e inactivadas a 80°C
durante 30 min para destruir a B. abortus pero conservar su ADN. Las muestras
fueron procesadas mediante la técnica de PCR en el INTA Rafaela (Dra S.
Echaide).
Se identificaron 4 muestras positivas mediante PCR
correspondientes a las de agua corriente y agua del arroyo del campo negativo y
experimentalmente inoculadas con B. abortus e inactivadas por calor en las
diluciones 1/100 y 1/1000. El resto de las muestras resultaron negativas,
inclusive las muestras de agua del arroyo con efluentes del frigorífico e
inoculada con B. abortus.
Se presume que la alta contaminación bacteriana de ese
tipo de muestra pudo inhibir la amplificación del ADN de las muestras. La
sensibilidad de la técnica deberá mejorarse para lograr resultados positivos
en diluciones mayores de 1/1000 de B. abortus.
Proteína BP26
Se continuó con los ensayos por ELISA con esta proteína
para uso complementario a la vacunación con Brucella modificada por ingeniería
genética. Los resultados hasta el momento no presentaron homogeneidad con
sueros de animales positivos determinados por pruebas de rutina y además por
fijación del complemento microtécnica. Se ha realizado una nueva purificación
de la proteína por HPLC y se espera continuar con su uso en ELISA.
Tipificación de cepas de Brucella por medio de PCR
- Un aislamiento de pulmón y líquido de abomaso de
feto (resultado RB51); caso clínico con abortos 10-15 días pos vacunación
con RB51.
- B. abortus aislada del semen de toros vacunados
(resultado RB51).
- B. abortus aislada del semen de toros vacunados y
desafiados con B. abortus 2308 (Resultado: cepa de desafío B. abortus
2308).
Saneamiento de rodeos
Se realizaron 4861 análisis para Diagnóstico serológico
de Brucelosis bovina. Las muestras provinieron de establecimientos que han
comenzado a controlar la enfermedad o que manifestaron problema de pérdidas
tacto-parto, de los Campos Experimentales y del Tambo de la EEA INTA
Balcarce.
Los sueros se procesaron por la prueba tamiz BPA,
realizando a los sueros positivos las pruebas complementarias de SAT y
2-Mercaptoetanol, en algunos casos fueron analizados por la prueba de Fijación
de Complemento en microplaca para confirmación de los resultados.
4. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL DE CASOS DE ABORTOS
Se analizaron 61 fetos y terneros muertos al parto de Bos
taurus de 32 establecimientos ubicados en 20 partidos de la Pampa húmeda. Los
fetos se originaron en 9 rodeos lecheros y 23 rodeos para carne. En 4 fetos no
se registró la procedencia. 35 fetos fueron machos, 16 hembras y en 10
oportunidades no se determinó. El aislamiento viral fue negativo.
El cultivo bacteriológico (54 casos) resultó positivo en
12 casos (7 casos involucrando agentes abortigénicos). Se logró un
diagnóstico final en 23/61 casos (37.7%) siendo más frecuente la etiología
infecciosa (17/61). Las causas bacterianas identificadas fueron a partir de
fetos procedentes de rodeos para carne. Brucella abortus y Campylobacter fetus
se aislaron en 3 oportunidades cada uno; Leptospiras spp. se identificó en 1
caso y Aeromona hydrophila en 2 casos, un caso con serología positiva al virus
de IBR y N.caninum (IHQ) en 6 fetos procedentes de rodeos para carne y 1 feto de
rodeo para leche.
Las pérdidas por causas determinadas no infecciosas fueron
6/61 (9.8%) todas de rodeos para carne y los casos indeterminados fueron 38/61
(62.3%). Dentro de este grupo, los fetos con lesiones histopatológicas que
sugieren una implicancia infecciosa fueron 19/61 (31.1%).
En el presente trabajo surge como relevante la presencia de
N. caninum en 7 de los casos estudiados. Brucella abortus figura como la causa
infecciosas bacteriana aislada con mayor frecuencia en fetos de rodeos para
carne lo que demuestra la presencia de la enfermedad en nuestros rodeos. Por
otro lado, el empleo de la IA en rodeos lecheros puede haber influenciado sobre
la ausencia de dichos agentes como fue informado previamente.
TUBERCULOSIS Y PARATUBERCULOSIS BOVINA
Apoyo en el diagnóstico, provisión de cepas y medios de
cultivo a Laboratorios de Diagnóstico Veterinario Regionales (Córdoba y Buenos
Aires) y del exterior del país. Se enviaron cepas de Mycobacterium avium subsp
paratuberculosis (Mptb) al Brasil (Universidad Federal de Río de Janeiro, Dr
Walter Lilembaum) con motivo de iniciar acciones de investigación conjuntas.
También se enviaron 80 cepas clasificadas de Mptb al Veterinary Research
Institute, Brno, República Checa (Dr Ivo Pavlik) para tipificación molecular
del cepario de Argentina y comparar por diferentes técnicas de biología
molecular (RFLP y MIRUs) los patrones genéticos de cepas argentinas aisladas de
bovinos y ciervos.
Interrelación entre paratuberculosis y deficiencias
minerales (cobre, hierro, zinc, molibdeno y selenio en agua, pasturas y suero)
en rodeos de la Pcia de Buenos Aires cuyos resultados sugirieron que la
deficiencia de selenio y la de cobre podría predisponer a la aparición de la
enfermedad en bovinos.
Saneamiento de rodeos con PTB. Se continuó con el
seguimiento de rodeos bovinos y de cérvidos seroreactores a paratuberculosis,
identificando cepas de materia fecal y órganos, caracterizando la patología
asociada. Se probaron diferentes kits de ELISA Parachek (New Zealand), Pourquier
(Francia) y ELISA INTA, para conocer sus diferencias en cuanto a sensibilidad y
especificidad) con sueros de animales infectados con aislamiento de Mptb y
sueros de rodeo general negativos, resultando en todos los casos mayor
sensibilidad de este último con respecto a los importados.
Ensayos de biología molecular para identificar antígenos
noveles de Mptb mediante el análisis de una biblioteca de expresión de Mptb y
utilizando sueros bovinos y de ratón inoculados para el inmunoescreening
identificando Bacterioferrina o antígeno D, HSP70 y dnaK y otros como pknB y
aceA como principales antígenos reaccionantes con sueros bovinos y de futura
aplicación diagnóstica o inmunogénica.
Evaluación de la acción de la pasteurización, con un
equipo pasteurizador de leche para terneros con infección experimental de cepas
de Mptb y otras micobacterias generando información útil y determinando una
buena eficacia del pasteurizador para eliminar mycobacterias como las probadas y
disminuir contagio en situaciones de alta incidencia de la enfermedad en tambos.
Patogenicidad y respuesta inmune en corderos infectados
experimentalmente, por serología, bacteriología y patología se evaluó la
infección de Mptb en corderos con cepas con variabilidad genética encontrando
que el patrón E podría ser más patógeno para ovinos aunque se desconoce la
prevalencia natural.
ELISA indirecto, se probó este test utilizando antígenos
recombinantes de Mycobacterium bovis (MPB 64, MPB 70, TPX, TRB, 2624, L7L12,
ESAT6, DES, P36, todos antígenos obtenidos en Argentina) y comparados con PPDb
para conocer sensibilidad y especificidad, con sueros de animales positivos al
aislamiento de M.bovis y animales positivos y negativos a gamma interferón y a
Prueba ano-caudal (Tuberculina). Los antígenos usados a la misma concentración
resultaron de utilidad para discernir entre infectados y no infectados siendo
algunos de ellos más promisorios para su uso como antígenos en
intradermoreacción y ELISA.
ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME BOVINA
Una actividad importante de la vigilancia epidemiológica
es el diagnóstico diferencial de enfermedades con signos neurológicos de los
bovinos de más de 12 meses de edad. El Grupo de Sanidad Animal del INTA
Balcarce forma parte de la red de Laboratorios de Diagnóstico Veterinario
receptores de material donde se realiza un diagnóstico diferencial primario y
luego el material es remitido al Centro Nacional de Referencia de la EEB que está
en INTA Castelar donde se aplican técnicas de diagnóstico más complejas. Se
realizó un curso de diagnóstico diferencial de enfermedades con signos
neurológicos de los bovinos y se presentó este tema en tres jornadas técnicas
de la región. Se recibió una misión técnica de la Unión Europea que está
auditando el programa nacional de vigilancia de la BSE.
Como parte del Servicio de Diagnóstico Veterinario
Especializado se recibieron 720 consultas. El 85 % correspondió a bovinos. En
40 casos se trató de enfermedades con signos neurológicos: Coccidiosis,
cetosis, encefalitis supurativa y no supurativa, hipomagnesemia, IBR
encefálico, Intoxicaciones por Claviceps purpurea y órgano fosforados,
listeriosis y tétanos. Durante este período se recibieron y procesaron 20
cerebros de bovinos mayores de 2 años. No hubo lesiones microscópicas de BSE
en ninguno.
BRUCELOSIS CAPRINA (Brucella melitensis)
Relevamiento serológico en caprinos y ovinos en un área con brucelosis
humana.
Como resultado de un brote de brucelosis humana el gobierno
de la provincia de La Rioja con la delegación local del SENASA realizó un
estudio serológico en un departamento del norte de esta provincia. Se
analizaron casi 6000 sueros de caprinos y ovinos de 120 propietarios de 10
distritos de un departamento. La seroprevalencia cruda fue del 4,4 % en caprinos
y del 0,4 % en ovinos. En 20 de los 120 rebaños se detectaron reactores
serológicos con una prevalencia del 0,3 al 52,6%. La dispersión geográfica no
es homogénea y la prevalencia interpredios relativamente baja lo que indicaría
reciente introducción de la infección y/o escaso movimiento entre distritos y
predios.
SALMONELOSIS AVIAR
Modelo experimental aplicado a la evaluación de vacunas y flora
competitiva para el control de la Salmonelosis aviar.
Se realizaron una serie de ensayos para estudiar
protección vacunal contra la Paratifosis causada por Salmonella Enteritidis. Se
utilizaron como modelo experimental aves libres de patógenos específicos y
criadas en estricto aislamiento. Para los ensayos se importaron dos partidas de
huevos del exterior, los cuales se incubaron en las instalaciones de una planta
de incubación local donde los pollitos BB fueron sexados por color de plumón
seleccionándose únicamente las hembras.
Durante el 2002 se realizaron: Ensayo 7 (36 aves, desde el
20 de marzo hasta el 20 de mayo); Ensayo 8 (34 aves, desde el 10 de julio hasta
el 4 de septiembre); Ensayo 9 (38 aves, desde el 10 de Julio hasta el 20 de
septiembre); Ensayo 10 (20 aves, desde el 10 de julio hasta el 17 de octubre); y
Ensayo 11 (68 aves, desde el 10 de julio hasta el 7 de noviembre). De todos
estos ensayos se realizaron los correspondientes informes técnicos y fueron
elevados en tiempo y forma de acuerdo con el contrato con la empresa contratante.
Detección e identificación de serovariedades de Salmonella de
importancia veterinaria y bromatológica mediante la técnica de PCR.
Se procedió a la organización del cepario de Salmonella
del laboratorio de Bacteriología que cuenta con 35 serovariedades. Se bio y
serotipificaron 115 cepas aisladas de diagnóstico, las que fueron incorporadas
al cepario. En las pruebas de PCR se seleccionaron primers. Para determinar si
la bacteria pertenece al género Salmonella se usó el primer Phop, que regula
la expresión de genes involucrados en la virulencia y en la supervivencia. Para
determinar si es virulenta y pertenece a las serovariedades Typhimurium,
Choleraesuis, Dublin, Enteritidis y Gallinarum se usó el primer Spv-C. Para
distinguir serovares inmóviles (Gallinarum con sus biovares gallinarum y
pullorum) de las móviles se usó el primer Hin que es específico para detectar
genes para flagelos. Otros dos primers, uno para detectar Salmonella spp.
(Inv-A) y otro para motilidad (H-li) no se seleccionaron por presentar
resultados variables.
Se comenzaron a efectuar ensayos, aplicando la técnica de
PCR a la detección de Salmonella en órganos extraídos de gallinas inoculadas
con la serovariedad Enteritidis. Se empleará el primer phoP para corroborar la
pertenencia de las cepas al Género Salmonella, el primer spv-C para detectar
cepas patógenas portadoras de plásmidos de virulencia y un primer específico
de la serovariedad Enteritidis.
TECNOLOGÍA IgY Ó INMUNOGLOBULINAS DE YEMA DE HUEVO
Búsqueda tamiz de proteínas con capacidad ligante para IgY, uso
terapéutico de IgY.
Se logró la estandarización y optimización de Pruebas de
Dot Blot y ELISA para la detección de cepas bacterianas que presenten posibles
proteínas de pared celular con afinidad para la IgY. En total se testearon 129
aislamientos bacterianos. Del total de cepas analizadas, se detectaron 7 cepas
como candidatas fijadoras de IgY. Se analizó la afinidad por la IgY de las
cepas seleccionadas mediante pruebas de ELISA. Las cepas se trataron con
distintas enzimas con capacidad de degradar la pared bacteriana (lisostafina y
lisozima), lográndose así la liberación de las proteínas de pared celular.
Eficacia de distintos métodos de purificación de IgY.
Se probaron las siguientes metodologías de extracción
utilizando: polietilénglicol, sulfato de amonio y ácido caprílico. Se
determinó la concentración de proteínas totales mediante el método de Lowry
y la concentración de IgY total mediante una prueba de ELISA.
Control Biológico de la Loque Americana.
Se realizaron cultivos y tipificaciones de Paenibacilus
larvae. Se logró un método de cultivo y esporulación in vitro. Se desarrolló
un modelo experimental reproducible de la Loque Americana en larvas
individualmente inoculadas. Se iniciaron trabajos de inmunización de gallinas.
Esta técnica se aplicará en un Proyecto PICT 2001 para el control biológico
de la enfermedad.
Mancha.
Se inició un trabajo en colaboración con la Universidad
de Davis, California, USA, para el diagnóstico de la mancha en bovinos mediante
uso de reactivos inmunofluorescentes de IgY. Se elaboraron vacunas con cepas
regionales de Clostridium chauvoei, Cl. septicum y Cl. perfringens.
Inmunoprofilaxis pasiva oral de las caries humanas con IgY anti
Streptococcus mutans.
Se aislaron cepas de Streptococcus mutans, principal agente
causal de la caries. Se elaboraron vacunas y se inocularon 3 gallinas con cada
una de las 3 aislamientos y con una cepa de referencia de la ATCC. Se obtuvo IgY
específica, la cual será utilizada para realizar ensayos tanto in vitro como
in vivo para evaluar la posibilidad de utilizar IgY para la inmunoprofilaxis de
las caries.
Timulina.
En colaboración con el Dr. Rodolfo Goya (INIBIOLP,
Facultad de Medicina, Universidad Nacional de La Plata) se inocularon gallinas
con el nonapéptido FTS (componente de la hormona Timulina) conjugado con KLH.
Las gallinas recibieron tres inmunizaciones y se recolectaron los huevos,
realizándose la extracción de IgY. Las inmunoglobulinas extraídas serán
utilizadas para el estudio de la función de la hormona timulina, mediante
ensayos de inmunoneutralización in vivo en ratas.
Otras aplicaciones de la tecnología IgY.
Se colaboró con la inoculación de gallinas para la
extracción de IgY de tres temas de interés para el grupo de Sanidad Animal:
Tritrichomonas foetus, Leptospira interrogans y Mycobacterium paratuberculosis.
ENFERMEDADES PARASITARIAS DE LOS RUMIANTES
Resistencia parasitaria a drogas antihelmínticas en rumiantes.
El objetivo es medir la reducción de la eficacia de drogas
antiparasitarias luego de varios años de uso. Este proyecto forma parte de un
programa nacional y regional. Se tomaron muestras en las primeras majadas de
ovinos de la región. No hay resultados aún para presentar.
FIEBRE AFTOSA
Monitoreo y vigilancia de la fiebre aftosa
Las actividades de este proyecto se mantuvieron en un nivel
mínimo por la reducción de las actividades de vigilancia epidemiológica al
nivel de las Fundaciones y de la Comisión Provincial de Sanidad Animal, la
desactivación de los laboratorios regionales para análisis de sueros y por
ende la falta de información regional para la realización de seminarios y
cursos.
Se participó activamente en el programa nacional de
vigilancia epidemiológica del SENASA integrando una comisión ad hoc
responsable del diseño de los muestreos seroepidemiológicos para evaluar la
actividad viral y la inmunidad poblacional. Los resultados fueron presentados
por la comisión a la misión de la Unión Europea en diciembre 2002.
ENFERMEDADES VIRALES DE LOS BOVINOS
Evaluación de vacunas experimentales del virus de la diarrea viral bovina
en bovinos, ovinos y cobayos. (Colaboración).
El control de la diarrea viral bovina se fundamenta en la
detección y eliminación de animales PI y en la estimulación de la producción
de Ac neutralizantes a través de la utilización de vacunas. En Argentina sólo
está autorizado el uso de vacunas inactivadas, siendo su eficacia muy discutida
debido, principalmente, a su baja inmunogenicidad.
En este trabajo se formularon 7 vacunas oleosas
experimentales. Grupos de bovinos, ovinos y cobayos fueron inoculados con dos
dosis de vacuna con un intervalo de 4 semanas. Los sueros obtenidos a diferentes
tiempos post-vacunación fueron procesados por seroneutralización (SN). A
excepción de las vacunas 5 y 6, todas las formulaciones indujeron
seroconversión en los tres modelos animales, alcanzando títulos neutralizantes
superiores a 2, los que se mantuvieron hasta los 180 días post-vacunación para
el modelo ovino y cobayo. Asimismo, los bovinos de estos grupos presentaron una
respuesta homogénea tanto con las cepas homólogas como heterólogas, indicando
una alta reactividad cruzada entre las mismas.
El alto grado de correlación observado entre el modelo
bovino-ovino y bovino-cobayo indica que estas especies podrían ser de utilidad
para realizar controles de calidad inmunogénica de las vacunas de DVB. La
diferencia en la respuesta observada entre la vacuna con alto título del VDVB,
y de las vacunas con bajo título, sugiere que la concentración de antígeno
sería el factor determinante relacionado con la calidad inmunogénica de las
vacunas inactivadas de DVB.
Evaluación de una vacuna experimental recombinante del virus de la
diarrea viral bovina. (Colaboración).
El objetivo del proyecto es el desarrollo y evaluación de
una vacuna recombinante formulada con una glicoproteína del VDVB. En la EEA
Balcarce se están realizado las pruebas de campo para valorar la capacidad de
protección de la vacuna en bovinos inmunizados y desafiados.
Se utilizaron 10 bovinos seronegativos al VDVB, de 12 meses
de edad, asignados a los siguientes tratamientos: Grupo A: seis animales
inmunizados con la vacuna recombinante; Grupo B: dos animales vacunados con
vacuna comercial y Grupo C: dos animales controles, seronegativos, no
vacunados.
Los animales del Grupo A y B recibieron dos dosis de las
respectivas vacunas por vía SC con un intervalo de 21 días. La segunda dosis
fue administrada 21 días antes de la infección experimental con VDVB. Los
animales de los 3 Grupos fueron desafiados intranasalmente con VDVB- NADL.
Todos los animales fueron controlados clínicamente y
muestreados diariamente durante 15 días post-desafío. El desafío se realizó
recientemente por lo que a la fecha se está en la etapa de muestreo y análisis
de laboratorio de las muestras. Se puede anticipar que no se observaron
diferencias significativas en los registros de temperatura corporal de los
grupos experimentales durante los días de observación. En 6 animales, dos de
cada Grupo, se detectó secreción nasal mucosa y diarrea leve e intermitente.
PROGRAMA DE INTERACCION PROFESIONAL
El objetivo es fortalecer la relación entre el sector
privado y el sector de investigación y extensión del INTA y la industria
veterinaria (en conjunto con la Unidad Operativa Cuenca del Salado).
Se recibieron planillas de 81 veterinarios con información
de 1066 casos de enfermedades de rumiantes. Se realizaron 4 Informes sanitarios
trimestrales y un Boletín anual, enviados por correo y email a los veterinarios
informantes y se lo incluyó en la pagina de Internet del Grupo
(www.inta.gov.ar/balcarce/gsa).
Se realizaron 13 talleres técnicos para profesionales y a
continuación se repitieron para productores en distintos partidos de la Cuenca
del Salado. Se presentaron dos temas: análisis de un año de información
sanitaria en la Cuenca y prevención y control de las principales enfermedades
registradas en este sistema. Asistieron 150 veterinarios y 203
productores.
Se realizaron tres Jornadas Técnicas de actualización
sobre enfermedades de la reproducción de los bovinos en Dolores, Chascomús y
Azul a las que asistieron 57 veterinarios.
Balcarce, marzo 2003.
Más información:
espath@balcarce.inta.gov.ar
Grupo de Sanidad Animal
Estación Experimental Agropecuaria Balcarce
|
