Memoria Anual 2001
Objetivos del Grupo
Desarrollar y adaptar tecnología para el diagnóstico,
control y prevención de los problemas de salud animal de importancia en la
región.
Usuarios
Productores y sus asociaciones; industria farmacéutica
veterinaria; veterinarios (rurales y de Laboratorios de Diagnóstico) y sus
asociaciones (Círculos y Colegios); Facultades de Veterinaria, Direcciones de
Ganadería de las provincias, SENASA (programas de control y erradicación de
enfermedades: aftosa, brucelosis, encefalopatía espongiforme bovina,
tuberculosis, paratuberculosis, leucosis y enfermedades de las aves), otras
unidades del INTA.
Actividades de comunicación
Extensión, transferencia de tecnología y comunicación
científica se canalizan a través de disertaciones destinadas a productores y
profesionales; publicación de artículos científicos y de divulgación y
comunicaciones cortas o conferencias en Congresos y Reuniones Técnicas. En el
último año se desarrolló una página en Internet (http://www.inta.gov.ar/balcarce/gsa
y http://www.intabalcarce.org/gsa)
para presentar toda la actividad de investigación, servicios y capacitación
ofrecida por el Grupo; además de información epidemiológica de enfermedades
en la región y artículos técnicos de actualidad.
Actividades de capacitación
El Grupo ofreció en el año 2001 12 cursos cortos de uno a
dos días de duración para profesionales, estudiantes avanzados y productores.
Desde el año 1989 funciona una Residencia Interna en Sanidad Animal para
Veterinarios recién graduados, realizan un entrenamiento de 18 meses en el
Grupo. Además se inició en el 2001 un programa para profesionales veterinarios
rurales en la Cuenca del Salado con el objetivo de mantener una capacitación
profesional continua, generar un banco de datos de enfermedades y difundir esta
información mediante informes y boletines técnicos.
DIAGNOSTICO VETERINARIO ESPECIALIZADO
El objetivo del proyecto es mantener en funcionamiento un
sistema de asistencia técnica veterinaria integral, con capacidad de
resolución de problemas de complejidad en salud animal.
La metodología consiste en la identificación,
caracterización y propuestas de medidas de control de problemáticas
sanitario-productivas que causan enfermedad, mortandad y baja productividad
(e.g. fertilidad, ganancia de peso, muertes perinatales). Para ello se cuenta
con un equipo de campo y especialistas en las disciplinas de microbiología,
bioquímica, virología, patología, toxicología y epidemiología. El
diagnóstico final y las medidas de control son remitidos al profesional que
efectuó la consulta mediante el envío de un informe final detallado. Por otra
parte se obtiene información regional que es transferida al medio, se genera un
banco de datos epidemiológico y se integra un sistema de vigilancia
epidemiológico pasivo de enfermedades exóticas regionales y nacionales.
Identificación y caracterización de problemas sanitarios.
En el año 2001 se recibieron 956 casos lo que representa
un aumento del 3.8% con respecto al año anterior, constituyéndose en la mayor
demanda de los últimos años, los meses de mayor demanda fueron julio y agosto.
Las muestras fueron remitidas desde 8 provincias y 71 partidos de Buenos Aires.
Asistencia a establecimientos con problemas sanitarios
La asistencia in situ a establecimientos con
problemas sanitario-productivos se efectuó en 106 oportunidades, recorriéndose
una distancia de 61000 km. Las muestras derivadas a los laboratorios sumaron
1068, el laboratorio de Bacteriología procesó el 25.8%, Patología el 19.8%,
Bioquímica el 12.5%, Toxicología el 11.6%, Virología el 10.8%, Parasitología
10.3% y enfermedades venéreas-neosporosis el 19,9 %.
Diagnósticos significativos
Hipomagnesemia fue la causa más importante de
muerte en vacas adultas debido a los factores climáticos, llegando a un
promedio de muerte del 5% en los rodeos afectados. También, relacionado al
exceso de lluvias, la Leptospirosis produjo graves pérdidas en vacas
(abortos) y mortandad en terneros de hasta 7 meses de edad. Carbunclo
bovino fue otra enfermedad diagnosticada con frecuencia, asociada también a
exceso de lluvias con altas temperaturas.
Investigación diagnóstica
Se concluyó un estudio en un establecimiento con 7% de pérdidas
tacto-parto, el diagnóstico incluyó distocia y neosporosis. Ante un presunto
caso de intoxicación por Lantana camara se efectuó la reproducción
experimental por alimentación forzada de un bovino; la especie resultó ser
altamente tóxica con signos de fotosensibilización por lesión hepática. Se
está realizando la reproducción experimental de la intoxicación en un ternero
con Prosopis caldenia (caldén) debido a la sospecha de acción tóxica
de esta especie. Se está evaluando la persistencia de la leptospiruria, la
vacunación y el tratamiento con antibióticos y su efecto en el siguiente
servicio (conjuntamente con el Laboratorio Azul).
ENFERMEDADES DE LA REPRODUCCIÓN DE LOS BOVINOS
1. TRICOMONIASIS
Se realizaron acciones de apoyo en el diagnóstico,
provisión de cepas y entrenamiento de personal técnico de los laboratorios de
diagnóstico veterinario a lo largo del año. También se realizó la primera
identificación de cepas no específicas de protozoos a partir de fluidos
prepuciales de 567 toros vírgenes A. Angus y Hereford de 1-2 años de los
cuales un 8.4% se obtuvieron cultivos de protozoos de morfología sugestiva de Tritrichomonas
foetus. Al realizar subcultivos, coloraciones especiales, microscopía
electrónica (scanning 5000 X) se observó un organismo con 4 flagelos
anteriores, axostilo y membrana ondulante siendo su patrón de PCR diferente a T.
foetus. Mediante caracterización de ultraestructura realizada en Brasil, se
determinó que se trataba del protozoo Tetratrichomonas pavlovi cuya
patogenicidad para el bovino se desconoce. Es factible que resulte un comensal
transitorio por al hábito de la monta entre sí que efectúan los toros
jóvenes. La presencia de estas cepas provoca falsos diagnósticos positivos y
crea confusión entre los laboratorios de diagnóstico quienes no poseen ningún
mecanismo para esclarecer el problema dado los costos e infraestructura
necesaria para montar la prueba de PCR, clave para aclarar esta problemática.
Se efectuó un ensayo de vacunación en hembras bovinas y posterior desafío con
toro infectado. Para ello se utilizó una vacuna a antígeno a subunidades
(vacuna Tf 1.17en adyuvante oleoso) elaborada por el Dr. BonDurant, Universidad
de Davis California, USA. Se aplicaron dos dosis de vacuna por vía subcutánea
con un mes de intervalo a 21 hembras bovinas siendo 25 los animales controles
sin vacunar. A los 10 días postvacunación (DPV) se efectuó el servicio
durante 3 meses con dos toros adultos, clínicamente aptos y naturalmente
infectados con T. foetus. Se recolectaron muestras de sangre y mucus para
análisis serológicos y cultivos respectivamente. Finalizado el ensayo se
efectuaron diagnósticos de preñeces constatándose para el grupo vacunado y
control 66% y 56 de preñez, respectivamente. Dicho ensayo no ha finalizado
estando en la etapa de procesado de las muestras.
2. CAMPYLOBACTERIOSIS
Se realizó el aislamiento, biotipificación y
criopreservación de cepas de Campylobacter fetus subspp. aisladas
durante el año 2001 que forman parte del cepario, integrado por miles de cepas
de distintos géneros bacterianos. Estas cepas se estudian para contar con las
mismas como antígenos vacunales experimentales, controles de medios de cultivo
o bien para su envío. Se continuó la evaluación de sueros de bovinos
vacunados contra campylobacteriosis, mediante el test de ELISA y
seroaglutinación, en ensayos a campo con rodeos infectados con Campylobacter
fetus. Se continuó el ensayo sobre evaluación de un conjugado producido en
gallinas vacunadas con cepas de Campylobacter fetus, para investigar la
presencia de anticuerpos en yema de huevo, y su comparación con otro elaborado
en conejos. Este método se empleó en la investigación de cepas problema
aisladas de animales infectados durante el año 2000, y se continúa actualmente
(todo el año 2001), mediante la producción de antígenos vacunales para la
inoculación de conejos y gallinas. Con esto se pretende repetir la experiencia
utilizando otras variables, que permitan demostrar la repetibilidad de alta
sensibilidad y especificidad lograda previamente, para poder comercializar el
reactivo. En conjunto con el Laboratorio Azul, se están testando muestras de
mujeres con problemas ginecológicos, para detección de infección genital por Campylobacter
fetus. INTA Balcarce provee al Laboratorio Azul los medios de cultivo para
efectuar la técnica de inmunofluorescencia directa con enriquecimiento previo,
y ellos elaboran los conjugados y realiza el procesamiento de las muestras.
3. NEOSPOROSIS BOVINA
Finalizó un proyecto financiado por la SECYT cuyo objetivo
fue la caracterización de pérdidas reproductivas en bovinos causadas por Neospora
caninum (NC). Los principales productos fueron:
- Conocimiento de la seroprevalencia a NC en rodeos para leche y carne de
diferentes zonas productoras del país;
- Evidencia de la enfemedad en fetos abortados provenientes de rodeos para
carne mediante la técnica de inmunohistoquímica;
- Implementación del cultivo in vitro de NC a partir de una cepa
cedida por la Dra. C. Venturini (F.Cs.Vet., UNLP) y elaboración de antisuero
policlonal para el diagnóstico por inmunohistoquímica de NC;
- Puesta a punto de la prueba serológica de inmunofluorescencia indirecta
para los trabajos seroepidemiológicos;
- Caracterización del rol de NC como agente abortigénico en fetos obtenidos
de casos naturales de campo,
- Dinámica de la serología a NC de la población canina que convive en
rodeos para carne y leche y
- Transferencia de la información lograda mediante charlas.
4. BRUCELOSIS
PCR: se prepararon macerados de órganos de fetos
congelados y cortes formolados para ser procesados por la técnica de la
reacción de la polimerasa en cadena (PCR) en el año 2002. Se aislaron 25 cepas
provenientes de abortos y otras aisladas con anterioridad al inicio del
proyecto, fueron tipificadas por métodos standard según los Manuales de
procedimientos de la OIE y enviadas al Instituto de Biotecnología de Castelar
para la realización de PCR y comparación de resultados. Se puso a punto la
técnica de IHQ para el diagnóstico de B. abortus a partir de pulmón
fetal y placenta fijados en formol bufferado al 10% teniendo como controles
positivos similares órganos obtenidos de animales abortados de los cuales se
logró el aislamiento en pureza de B. abortus. Las muestras fueron
procesados mediante la técnica de Avidina Biotina (Vector, Peroxidasa Elite ABC
PK-601). Se observaron uniones antígeno-anticuerpo en el lumen de los
bronquíolos pulmonares y placenta de fetos positivos a B. abortus.
Técnicas serológicas para Brucelosis: el laboratorio de
INTA Balcarce (L 125) se encuentra habilitado por SENASA para dar resultados
oficiales de Fijación del Complemento microtécnica (FCm). Por este motivo se
usó esta técnica para compararla con otras como ELISA indirecto y
tradicionales (BPA, SAT, 2ME) en casos diagnósticos y seguimientos de problemas
de abortos bovinos. Se efectuaron 150 pruebas de FCm de casos de diferencias
tacto-parto, casos de abortos y de diagnóstico de rutina. Fueron procesados 74
líquidos de diferentes cavidades de fetos arribados al Servicio de Diagnóstico
y de otros 14 provenientes de abortos de fetos con aislamiento de Brucella
abortus y vacas positivas a Brucelosis, con el objeto de evaluar la
importancia de este material para el diagnostico diferencial. Si bien no se
detectaron altos títulos o las aglutinaciones parecieron inespecíficas, la
técnica de FCm resultó positiva en algunos fetos que tuvieron aislamiento de B.
abortus, indicando que la dinámica de los anticuerpos a brucelosis en esos
líquidos podría tener valor diagnóstico usando FCm. Se analizaron 30 sueros
de perros con antecedentes de Brucelosis canina identificando seroreactores y
aislando una cepa por hemocultivo de una perra que abortó 5 cachorros.
Se recibieron 3476 sueros bovinos de distintos
establecimientos para el saneamiento de brucelosis y se recibieron 196 sueros
para dilucidar el status serológico mediante la prueba de FCm (La. de
referencia).
TUBERCULOSIS Y PARATUBERCULOSIS BOVINA
Los objetivos son la evaluación de nuevos métodos de
diagnóstico para las dos enfermedades comparando sensibilidad y especificidad,
practicidad y costo para perfeccionar y difundir modelos de control de la
paratuberculosis y tuberculosis.
Técnicas serológicas en Tuberculosis: Se probó
ELISA indirecto, utilizando antígenos recombinantes de Mycobacterium bovis
(MPB 64 y MPB 70). Se realizaron ensayos de ajuste de la técnica y análisis
comparativo con el uso de estos antígenos y PPD bovina o la mezcla de ellos
para conocer sensibilidad y especificidad, con sueros de animales positivos al
aislamiento de M.bovis y animales positivos y negativos a gamma
interferon y a la prueba ano-caudal (Tuberculina). MBP 70 resultó sensiblemente
superior a MBP64 para su uso en ELISA, mientras que la técnica fue menos
sensible utilizando como antígeno PPD bovina. El uso de estos antígenos
recombinantes es promisorio pero es necesaria la selección adecuada de más de
un antígeno de M.bovis para el uso en pruebas como ELISA que midan
anticuerpos en Tuberculosis bovina.
ENCEFALOPATIA ESPONGIFORME BOVINA
La Fiebre Aftosa y la EEB (o BSE en inglés) son las dos
principales enfermedades que afectan el comercio internacional de carne y sus
productos. La Argentina cuenta desde el año 1991 con un programa nacional de
vigilancia epidemiológica de la EEB. Esto es necesario para seguir manteniendo
el estado de país libre y de Riesgo Geográfico I (para la Unión Europea), el
más bajo de todos. Una actividad importante de la vigilancia epidemiológica es
el diagnóstico diferencial de enfermedades nerviosas en bovinos de más de 6
meses de edad. Existe una red de Laboratorios de Diagnóstico Veterinario
receptores de material donde se realiza un diagnóstico diferencial primario y
luego el material es remitido al Centro Nacional de Referencia de la EEB que está
en INTA Castelar donde se aplican técnicas de diagnóstico más complejas. El
Laboratorio del Grupo de Sanidad Animal del INTA Balcarce forma parte de esta
red. Durante el año 2001 se recibieron y procesaron 19 cerebros de bovinos de
11 meses a 2 años, pertenecientes a 15 partidos de dos provincias. Dos bovinos
tenían IBR, 2 Listeriosis y 15 sin diagnóstico. No hubo lesiones
microscópicas de BSE en ninguno.
SALMONELOSIS AVIAR
El objetivo es el desarrollo de un modelo experimental
aplicado a la evaluación de vacunas y flora competitiva para el control de la Salmonelosis
aviar.
Se logró el desarrollo de un modelo experimental para la
reproducción de la tifosis en pollos de 20 días, se determinó la dosis letal
50% y se estandarizaron las condiciones del ensayo. Se demostró un aumento de
virulencia de la cepa de Salmonella Gallinarum empleada mediante pasajes
por aves, de modo que se establecieron parámetros de conservación de la cepa
liofilizada con un número fijo de pasajes in vitro. La técnica de
acriflavina se consideró adecuada para establecer el carácter liso de las
cepas. Se compararon los medios de cultivo, seleccionándose el agar Verde
Brillante para los cultivos de S.gallinarum. Se estandarizaron técnicas
rápidas de recuento de Salmonella en hígados. Se logró elaborar un
extracto de inmunoglobulinas de yema de huevo (IgY) para el diagnóstico rápido
por la técnica de inmunofluorescencia directa. Se iniciaron estudios
moleculares de PCR mediante una tesis de la Universidad Nacional de Mar del
Plata. Se optimizó la técnica de aglutinación en placas de micro-titulación
con coloración de los antígenos con verde brillante y violeta de genciana.
Mediante la colaboración del Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas
ANLIS se recibieron sueros para tipificar las cepas, estableciéndose el método
diagnóstico serológico en la EEA de Balcarce. Se caracterizaron cepas del INTA
de Concepción del Uruguay.
ENFERMEDADES PARASITARIAS
Efectos productivos de las parasitosis en vaquillonas al
parto. El objetivo de este trabajo es estudiar el efecto en la recuperación
post-parto para una nueva preñez, el peso del ternero al destete, con el uso de
antiparasitarios de larga acción (ivermectina 3,15%) aplicadas al parto. Se
mide evolución del peso corporal de madres y terneros, preñez y su
distribución. El trabajo está en desarrollo.
Resistencia parasitaria a drogas antihelmínticas en
rumiantes. El objetivo es medir la reducción de la eficacia de drogas
antiparasitarias luego de varios años de uso. Los resultados obtenidos en un
establecimiento de la zona son un ejemplo de la aplicación repetida de la misma
base de droga. Las eficacias a diferentes drogas antiparasitarias detectadas en
Octubre del 2001 fueron: Levamisole: 98,8%; Ivermectina al 1%: 51,4% (no usada
desde 4 años atrás por presentar resistencia en 1997); Moxidectin 65,2% (usada
desde 1997 donde había dado 99,9% de eficacia); Closantel: 93,6%,esta droga es
específica para Haemonchus, Chabertia y Oesophagostomun. A
partir de estos resultados y del recuento de larvas en lavado de pasto de todos
los potreros se estableció un programa de uso de potreros - con bovinos y
ovinos según las diferente cargas de larvas - y de drogas.
FIEBRE AFTOSA
Monitoreo y vigilancia de la fiebre aftosa en la
región. En marzo de 2001 la SAGPyA reconoció la existencia de la fiebre
aftosa en el país, se presentó un nuevo programa de Control y Erradicación y
se empezó a reorganizar las Fundaciones de Lucha Antiaftosa y las actividades
de vigilancia. Las actividades de este proyecto se mantuvieron en un nivel
mínimo por la reducción de las actividades de vigilancia epidemiológica al
nivel de las Fundaciones y de la Comisión Provincial de Sanidad Animal, la
desactivación de los laboratorios regionales para análisis de sueros y por
ende la falta de información regional para la realización de seminarios y
cursos. Se dieron numerosas disertaciones sobre la situación de la fiebre
aftosa y el diagnóstico diferencial; se asistió a numerosas sospechas de
fiebre aftosa en establecimientos ganaderos de la región, dándose parte al
SENASA cuando correspondía y se redactaron artículos técnicos para difusión.
Tanto la SAGPyA como el SENASA requirieron la presencia del INTA en comisiones
nacionales de epidemiología, virología y bioseguridad.
ENFERMEDADES VIRALES DE LOS BOVINOS
Aplicación de la biotecnología en el estudio de virus
de importancia económica para la producción de bovinos
Serología fetal: Se aplicó la técnica de seroneutralización para
determinación de anticuerpos específicos contra los virus de la diarrea viral
bovina y herpesvirus bovino. De 95 fetos abortados analizados se detectaron 43
(45,3%) positivos al BVDV y 29 (30,5%). La aplicación de esta técnica permite
identificar la infección viral en un significativo número de fetos abortados.
PCR en fluidos fetales: Se inició un estudio para la puesta a punto
del método de PCR para determinar infecciones fetales con los virus de la
diarrea viral bovina y herpesvirus bovino, a partir de muestras de fluidos de
fetos abortados. Los resultados preliminares obtenidos indican buena
sensibilidad del PCR para identificar infecciones fetales, donde el asilamiento
viral muestra baja sensibilidad.
Análisis de casos con diagnóstico de necrosis
cerebrocortical y su relación con herpesvirus bovino tipo 5: Ochenta y
nueve casos de necrosis cerebrocortical (NCC) en bovinos de tres regiones de la
Provincia de Buenos Aires, Argentina, recibidas para diagnóstico entre 1970 y
1999, fueron analizadas para establecer la asociación de Herpesvirus Bovino
Tipo-5 (HVB-5) con tal patología. Tejido nervioso fijado en parafina fue
procesado y teñido con hematoxilina-eosina y el cADN-BHV-5 fue evidenciado por
hibridización in situ. Las lesiones fueron clasificadas en una escala de
0 - 3. La mayor prevalencia de brotes fue registrada entre 1979 y 1984,
principalmente durante la primavera. No hubo diferencias (P >0,05) en las
tasas de morbilidad, mortalidad y letalidad entre grupos etarios, sistemas de
producción y regiones. Amaurosis (48%), ptialismo (42%), torneo (40%), ataxia
(36%) y bruxismo (37%) fueron los síntomas más frecuentemente observados. Las
lesiones estuvieron principalmente distribuidas en la corteza anterior y
posterior (90,6%) y diencéfalo (36,5%). Meningitis y manguitos perivasculares
(94,4%) y gliosis difusa o focal (77,5% y 73%, respectivamente) fueron las
lesiones predominantes del cerebro. Focos de necrosis fueron observados en el
66,6% de los casos, mientras que las hemorragias no resultaron lesiones
relevantes. HVB-5 fue aislado en 9 de 19 casos registrados a partir de 1992 y
cADN-HVB-5 fue detectado en 3 de 9 casos evaluados. La identificación viral en
casos con lesiones severas (grado3) resultó negativa. El presente estudio ha
posibilitado caracterizar una entidad cuya etiología generalmente permanecía
indeterminada. La correspondencia de estas observaciones con el aislamiento
viral de tejido nervioso de casos con similares características
clínico-epidemiológicas y patológicas permiten concluir sobre la asociación
del HVB-5 y lesiones de NCC.
PROGRAMA DE INTERACCION PROFESIONAL
El objetivo es fortalecer la relación entre el sector
privado y el sector de investigación y extensión del INTA y la industria
veterinaria (en conjunto con la Unidad Operativa Cuenca del Salado)
Se realizaron 13 talleres técnicos para profesionales y a
continuación se repitieron para productores en distintos partidos de la Cuenca
del Salado. Se presentaron dos temas de actualidad: Aftosa y manejo de las
parasitosis a la entrada del invierno. Asistieron 160 veterinarios y 250
productores. Se realizó una encuesta para conocer la demanda de capacitación.
Se informó e interesó a los asistentes sobre un sistema de información basado
en el registro de enfermedades en rumiantes diagnosticadas por veterinarios
rurales. Se diseñó la planilla ad hoc para registro de enfermedades y
se envió un cuadernillo con instrucciones a cada veterinario asistente a los
talleres. Se realizaron tres Jornadas Técnicas de actualización sobre
enfermedades de la reproducción de los bovinos en Dolores, Chascomús y Azul a
las que asistieron 80 veterinarios. Se recibieron planillas de 20 veterinarios
con información de 166 casos de enfermedades de rumiantes. Se realizó un
Informe sanitario trimestral enviado por correo y email a los veterinarios
informantes y se lo incluyó en la página de Internet del Grupo.
Balcarce, marzo 2002.
Más información:
espath@balcarce.inta.gov.ar
Grupo de Sanidad Animal
Estación Experimental Agropecuaria Balcarce
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